細胞工廠多用于貼壁細胞的大規(guī)模培養(yǎng),在細胞生長到一定程度之后就需要收獲細胞了。由于貼壁細胞是貼附在容器的底部生長,因此在收獲細胞的時候需要借助胰酶對細胞進行消化之后再收獲。
胰酶屬于異種蛋白酶,可以將細胞膜上和細胞培養(yǎng)瓶結合的蛋白質(zhì)降解。通過在特定位置上降解蛋白,使蛋白間結合處蛋白降解,細胞由于自身內(nèi)部細胞骨架張力作用下成為球形,從而使細胞分開。消化細胞的具體的步驟如下:
1、首先我們需要將細胞工廠內(nèi)的培養(yǎng)液導出,這時候我們可以借助專用的管路系統(tǒng),以減少細胞外源污染的風險;
2、導出培養(yǎng)液后,加入適量胰酶細胞消化液,略蓋過細胞即可,根據(jù)胰酶效率差異可以增加或減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘(不同的細胞消化時間有所不同),依次搖晃容器終止消化,前后左右各10次,靜置觀察細胞解離后效果。
3、收集細胞懸液至儲液桶即可。
在利用胰酶消化細胞工廠中細胞的時候,我們需要注意控制好消化時間,防止因為消化過度而影響細胞的活性,影響后期的實驗。
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