細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候需要用到各種溶液,如培養(yǎng)基、緩沖液等,其中胰酶也是非常重要的一種溶液。雖然每種細(xì)胞的培養(yǎng)條件各不相同,但是,在細(xì)胞傳代過程中都少不了這個(gè)步驟—胰酶消化。那么,在使用胰酶消化細(xì)胞的時(shí)候,我們應(yīng)該注意什么呢?
胰酶是一種蛋白酶,酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈,通過在特定位置上降解蛋白,使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解,從而使兩者分離。這時(shí),細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。
胰酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞,如胚胎、上皮、肝、腎等組織,但對(duì)纖維性組織和較硬的癌組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。
在使用胰酶消化細(xì)胞工廠中的細(xì)胞時(shí),我們一定要控制要消化時(shí)間,一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,只要能移動(dòng)了,多半呈沙狀移動(dòng)就可以了,就應(yīng)該停止消化。此外,如果使用了胰酶,細(xì)胞還是成團(tuán),可能是消化時(shí)間不夠、胰酶的消化濃度不夠、細(xì)胞密度過高或者使用了過期胰酶。
綜上所述,使用胰酶消化細(xì)胞工廠中的細(xì)胞時(shí)需要注意控制消化時(shí)間,使用前觀察胰酶是否過期,避免因?yàn)橐让高^期影響細(xì)胞生長狀態(tài)。
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