細胞培養(yǎng)瓶多用于貼壁細胞的培養(yǎng),不同于懸浮細胞在培養(yǎng)基中生長,貼壁細胞需要貼附在容器的表面生長,所以進行收獲或者傳代的時候要先將細胞消化下來。消化細胞的方法有多種,常見的主要是以下幾種:
1、酶消化法
這也是我們日常中使用比較多的一種方法,一般使用胰酶消化,濃度在0.25%-0.5%之間,消化時間根據(jù)細胞種類、操作手法、溫度等因素而不同。消化完之后,需要用血清或者含血清的培養(yǎng)基終止消化。
2、物理法
不借助胰酶,直接吹打或用細胞刮刀將細胞培養(yǎng)瓶表面的細胞消化下來,對于貼壁很牢的細胞可以使用這種方法。但要注意,吹打和刮刀都會給細胞造成一定的損傷,一般不建議使用這種方法。
3、冷凍法
利用細胞冷凍后收縮的原理,讓細胞在從培養(yǎng)瓶上脫落。這種方法對細胞的損傷小,適用于貼壁不是特別緊,又特別嬌氣的細胞。如間充質干細胞、DC細胞等。
4、離子螯合劑
不破壞細胞表面分子,僅與CAMs螯合。一般使用EDTA比較多,濃度在0.02%左右。作用于細胞與間質,對細胞間也有一定作用。注意,它能顯著影響pH值,而且在弱堿性條件下才易溶。因此,配制時應調節(jié)好酸堿度。它不能被終和。因此,消化下來的細胞要洗一遍。
以上就是消化細胞培養(yǎng)瓶中細胞常用的幾種方法,綜合來看,酶消化法是應用較多的一種。當然也要根據(jù)細胞的種類及特性,選擇合適的消化方法。
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