細胞工廠是近幾十年逐步出現(xiàn)在國內(nèi)科研室和疫苗生產(chǎn)廠家的視線中,細胞培養(yǎng)已廣泛應用于醫(yī)學的各個領域,通過體外培養(yǎng),可以獲得單一種類的細胞,今天根據(jù)細胞工廠廠家來跟大家分享一下使用細胞工廠來培養(yǎng)細胞時內(nèi)部細胞不貼壁該怎么辦
細胞的傳代最重要的是胰酶處理時間:消化不夠細胞本身就是成團的;若胰酶處理太久,容易造成細胞膜蛋白損傷,使細胞貼壁不緊,顯微鏡下觀察立體感不強,嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。
解決辦法:縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度。
缺少貼壁因子:血清中含有促貼壁因子,而無血清培養(yǎng)基工藝中由于缺少這種促貼壁因子,細胞的貼壁效果會下降很多。
解決辦法:更換血清。
支原體或細菌的污染。
解決辦法:分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。
培養(yǎng)液配置、儲存不當,如 pH 值過堿,Gln 量太少等原因。
解決辦法:使用無菌醋酸溶液調(diào)整 pH 值或充入無菌 CO2。
復蘇的細胞本身狀態(tài)不好,已經(jīng)老化,失去貼附性。
解決辦法:啟用新的保種細胞。
如果細胞比較珍貴或沒有備份細胞
解決辦法:可嘗試將不貼壁細胞收集離心,再用 PBS 將沉淀清洗一遍,離心后的沉淀加入胰酶重新消化接種,同時提高血清濃度到 15%~20%。
這就是細胞工廠內(nèi)細胞不貼壁的原因了,希望對大家有所幫助。
上一篇: 影響細胞工廠效果的操作細節(jié)